產(chǎn)品名稱：狗血小板活化因子檢測(cè)試劑盒

英文名稱：PAKL Elisa Kit

檢測(cè)原理：采用雙抗體夾心ABC-ELISA法

保存溫度：短期4℃/長(zhǎng)期-20℃保存

酶標(biāo)包被板：96孔/48孔（48T酶標(biāo)包被板是96T一半）

性 狀：盒裝液體

狗血小板活化因子檢測(cè)試劑盒方法一 用于檢測(cè)未知抗原的雙抗體夾心法：

1. 包被：用0.05M PH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1～10μg／ml。在每個(gè)聚苯乙烯板的反應(yīng)孔中加0.1ml，4℃過(guò)夜。次日，棄去孔內(nèi)溶液，用洗滌緩沖液洗3次，每次3分鐘。（簡(jiǎn)稱洗滌，下同）。

2. 加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中，置37℃孵育1小時(shí)。然后洗滌。（同時(shí)做空白孔，陰性對(duì)照孔及陽(yáng)性對(duì)照孔）。

3. 狗血小板活化因子檢測(cè)試劑盒加酶標(biāo)抗體：于各反應(yīng)孔中，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體（經(jīng)滴定后的稀釋度）0.1ml。37℃孵育0.5～1小時(shí)，洗滌。

4. 加底物液顯色：于各反應(yīng)孔中加入臨時(shí)配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃10～30分鐘。

5. 終止反應(yīng)：于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml。

6. 結(jié)果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結(jié)果：反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深，陽(yáng)性程度越強(qiáng)，陰性反應(yīng)為無(wú)色或極淺，依據(jù)所呈顏色的深淺，以“+”、“-”號(hào)表示。也可測(cè)O·D值：在ELISA檢測(cè)儀上，于450nm（若以ABTS顯色，則410nm）處，以空白對(duì)照孔調(diào)零后測(cè)各孔O·D值，若大于規(guī)定的陰性對(duì)照OD值的2.1倍，即為陽(yáng)性。

狗血小板活化因子檢測(cè)試劑盒方法二 用于檢測(cè)未知抗體的間接法：

用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1～10μg／ml， 每孔加0.1ml，4℃過(guò)夜。次日洗滌3次。

                                   ↓

加一定稀釋的待檢樣品（未知抗體）0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育1小時(shí),洗滌。（同時(shí)做空白、陰性及陽(yáng)性孔對(duì)照）

                                   ↓

于反應(yīng)孔中，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)**抗體（抗抗體）0.1ml，37℃孵育30-60分鐘，洗滌,*后一遍用DDW洗滌。

                                   ↓

其余步驟同“雙抗體夾心法”的4、5、6。

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